上海江萊生物科技有限公司為您提供人可溶性淀粉酶前體蛋白檢測試劑盒---供應(yīng)專場。
1待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl�！�
2酶標板置4℃，包被過夜。
3洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后，即甩去，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
4陰性對照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
5酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min�！�
6洗板，同4�！�
7每孔加1:5000稀釋的hrp-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl�！�
8酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
9洗板，同4�！�
10每孔加tmb顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min�！�
11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng)。
12分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，終測得的od值為兩者之差w1-w2，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13數(shù)據(jù)處理：在得出標本s和陰性對照n的 od值后，計算s/n值。s/n***2.1為陽性判定標準。
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