注意事項
1. 為了避免蛋白---性，不要對樣品劇烈攪動和反復凍融。
2. 緩沖溶液成分盡量模擬細胞內環。。
3. 為了避免蛋白質的氧化，將 0.1～1 mmol/ldtt二硫蘇糖醇(或 β-巰加入到緩沖溶液中。
4. 為了避免重金屬對目標蛋白的破壞，將 1～10 mmol/ledta 金屬螯合劑加入。
5. 為了避免微生物生長，使用滅菌溶液。在純化任何一種蛋白質的時候，均必須時刻對它的穩定性注意維護，實時熒光定量pcr，使它的活性得到保護，需要牢記如下一些通用的注意事項。
6. 盡可能置于冰上或者在冷庫內進行操作。
7. 蛋白濃度不要太稀。
8. 除非是進行---層。否則 ph 需要合適，---多少錢，防止所使用的緩沖溶液 ph 與 pi 相同，使蛋白質的沉淀得以避免。
9. 使用蛋白酶，避免蛋白酶對目標蛋白的降解；在純化細胞中的蛋白質時，將 dna 酶加入來使得 dna 降解，避免 dna 對蛋白的污染。
rna提取及注意事項
研究基因的表達和調控時，需要從組織或細胞中分離純化rna。rna的高低經常影響rt-pcr、cdna庫構建和northern blot等分子生物學實驗的成敗。
主要試劑
trizol是一種新型總rna抽提試劑，內含異---胍等物質，能迅速破碎細胞，抑制細胞釋放出的---酶。
1.
trizol試劑含有，具有毒性和---性，注重操作。
2.
rnase污染的主要來源是操作過程中手和空氣中的浮沉，注重配帶手套，樣品盡可能蓋嚴。
3. 細胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全會降低后得率，因為一部分rna會殘留在未裂解的細胞中。細胞裂解之后要看不見顆粒狀物質結締組織和骨除外。在清洗和裂解細胞時在低溫下操作，實時定量pcr，防止在操作過程中釋放的內源rnase降解了rna。
4. 酵母和一些---由于細胞壁的---結構，可以加入trizol試劑同時加入無rnase的玻璃珠并劇烈振蕩，廣元pcr，使細胞裂解充分。
2-8℃ 避光保存一年。
rna提取
1.棄去培養液，用pbs清洗兩次1-2。
2.棄去pbs，用1000u1吸干凈殘余pbs。
3.加1ml trizol研磨b 41。
4. 1.5miep管標號與每孔相對應備用。
5.研磨好的溶液轉移至對應的 ep管中國。
6.往每個ep管中加入250ul，劇烈震蕩30s， 冰上靜置12min[問l。
7. 所有樣品4c離心，轉速: 13500轉1分鐘，時間: 15min.
8. 再次標記一批同樣編號ep管。
9.離心后吸上清液400u1移入相應編號的ep管中，再加入400ul異充
分混勻。4c冰箱35min。
10. 4c離心，轉速: 13500轉1分鐘，時間: 10min.
11.棄去.上清液，加1m175%---，輕搖7]。
12. 4c離心，10600轉/分鐘，時間: 5min.
13. 棄上清液濾紙吸干。
14. 加depc水10ul溶解，-80c保存。進行逆轉錄前測濃度。
組織rna提取
1、剪米粒大小組織塊放入ep管中標號。
2、ep管中加300ul trizol浸泡30分鐘或更久。
3、用研磨棒研磨，以肉眼很難看到組織為宜。
4、加700u1 trizol靜 置5分鐘。
登錄后臺
