7.如何檢測引物的純度？
答：實驗室方便的作法是用page方法。使用加有7m尿素的16%的聚---凝膠進行電泳。取0.2-0.5od的引物，用尿素飽和液溶解或引物溶液中加入尿素干粉直到飽和，上樣前加熱變性(95℃，2mins)。加入尿素的目的一是變性，二是增加樣品比重，容易加樣。600v電壓進行電泳，一定時間后(約2-3小時)，剝膠，用熒光tlc板在紫外燈下檢測帶型，在主帶之下沒有雜帶，說明純度是好的。如果條件許可，也可以用eb 染色或銀染方式染色。
而有的廠家提供maldi-tof質譜qc控制，從而保障了合成的準確率：
bioneer使用多重maldi-tof質譜儀進行全自動裝載及監測。 每份樣品的質譜分析數據將自動插入到寡核苷酸的信息單中。bioneer是上僅有的幾個對生產的每份核苷酸 (單個寡核苷酸和高通量和成) 都用maldi-tof質譜儀檢測進行核苷酸qc檢測的廠商，云南pcr，而且免費提供質譜數據。
8.如何計算引物的濃度？
答：引物保存在高濃度的狀況下比較穩定。引物一般配制成10-50pmol/ul。 一般情況下，建議將引物的濃度配制成50pmol/ul，加水的體積微升按下列方式計算：v (微升)= od數*乘33 *乘*乘20000 / (除) 引物的分子量。引物的分子量可以從合成報告單上獲得。如果需要配制成其他濃度，---，按上述公式換算。
注意：1 od260= 33 ug/ml.
3、參數設置
使用488nm激發波長，525nm發射波長，實時或逐時間點檢測---前后熒光的強弱。dcf的熒光光譜和fitc非常相似，可以用fitc的參數設置檢測dcf。dcf的激發光譜和發射光譜參考下圖。
4、其它說明
陽性對照可以按照1：1000的比例使用。例如裝載好探針的細胞共1毫升，可以加入1微升的陽性對照---。通常---后20-30分鐘內可以觀察到非常---的活性氧水平升高。對于不同的細胞，活性氧陽性對照的效果可能有較大的差別。如果在---后30分鐘內觀察不到活性氧的升高，可以適當提高活性氧陽性對照的濃度。如果活性氧升高得過快，可以適當降低活性氧陽性對照的濃度。
另外，對于某些細胞，如果發現沒有---的陰性對照細胞熒光也比較強，可以按照1：2000-1：5000稀釋dcfh-da，---怎么做，使裝載探針時dcfh-da的濃度為2-5微摩爾/升。探針裝載的時間也可以根據情況在15-60分鐘內適當進行調整。
southern雜交
實驗原理
southern印跡雜交southern blot是1975年由英---southern創建，實時熒光定量pcr，是研究dna圖譜的基本技術。southern印跡雜交是進行基因組dna特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經---性內切酶---的dnal片段，將膠上的dna變性并在原位將單鏈dnal片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上，經干烤或者紫外線照射固定，再與相對應結構的標記探針進行雜交，用放l射自顯影或酶反應顯色，從而檢測特定dna分子的含量。
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