11.如何溶解引物？
答：干燥后的引物質(zhì)地非常疏松，開蓋前好離心一下，或管垂直向上在桌面上敲敲，將引物粉末收集到管底。根據(jù)計算出的體積加入去離子無菌水或10mm tris ph7.5緩沖液，室溫放置幾分鐘，振蕩助溶，---怎么做，離心將溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸餾水，因為有些蒸餾水的ph值比較低ph4-5，pcr實驗室，引物在這種條件下不穩(wěn)定。
12.如何保存引物？
答：引物合成后，經(jīng)過一系列處理和純化步驟，旋轉(zhuǎn)干燥而成片狀物質(zhì)。引物在溶解前，室溫狀態(tài)下可以長期保存。溶解后的引物-20度可以長期保存。如果對實驗的重復(fù)性要求較高，合成的od數(shù)較大，建議分裝，避免反復(fù)凍融。修飾熒光引物需要避光保存。
分子實驗介紹——印跡western blot檢測
通過sds-page凝膠將細胞或生物樣品內(nèi)的蛋白按照蛋白分子量從大到小規(guī)律分離開。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體例如纖維素薄膜或pvdf膜上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的起反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二起反應(yīng)目前主要用hrp標(biāo)記的第二，經(jīng)過底物顯色或自顯影以檢測電泳分離的特---目的基因表達的蛋白成分目前主要使用魯米諾和二-的hrp反應(yīng)發(fā)出熒光，通過儀器或者膠片顯色。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達。
實驗流程：細胞收集-細胞裂解，蛋白提取-蛋白變性-sds-page電泳-蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜印記-蛋白封閉-目的孵育-二抗孵育-顯色拍照
結(jié)果示例：
圖 a不同大小的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞后，western blot檢測圖片；b a蛋白不同培養(yǎng)時間后western blot檢測圖片；c 使用image pro plus軟件對a蛋白灰度檢測，a蛋白表達變化統(tǒng)計圖
動物組織細胞基因組dna提取
操作步驟
1. 取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g0.5cm3，盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，轉(zhuǎn)入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶k
500ug/ml20μl，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉(zhuǎn)入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數(shù)次。于臺式離心機以12000 rpm離心5min，取上清液入另
一離心管中。
2.加2倍體積異，倒轉(zhuǎn)混勻后，可以看見絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，黑龍江pcr，用200ul te 重新溶解。可進行pcr反應(yīng)等，需要進一步純化的按下列步驟進行
3.加等量的酚??振蕩混勻，離心12000 rpm，pcr引物設(shè)計，5min。
4.取上層溶液至另一管，加入等體積的?，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。
5. 取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/l氨加入2倍體積的無水---，混勻后室溫沉淀2min ，離心12000 rpm ，10min。
6.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。
7.用1ml 70%---洗滌沉淀物1次，離心12000 rpm ， 5min。
8.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。
9.加200ul te重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?c20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
10.吸取適量樣品于genequant上檢測濃度和純度。
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