大鼠主動脈內皮細胞的分離培養
方法:分離大鼠主動脈,直接貼壁于培養皿中,熒光倒置顯微鏡觀察細胞形態,免yi組化ⅷ因子相關抗原染色鑒定細胞.結果:約24小時組織塊邊緣有游離的 新生細胞長出,7天即融合成片.-傳代后細胞呈短梭形或三角形,單層生長,鋪路石狀,ⅷ因子表達陽性,呈指數增殖.凍存后復蘇細胞活性均超過90%.結 論:用貼壁法成功建立了大鼠血管內皮細胞體外培養方法,凍存細胞存活率高,為體外研究提供了穩定的模型.
關于細胞培養的常見問題
q:培養液到底要不要加雙抗青&鏈?
a:雙抗不是細胞生長必需的。我們培養細胞時不常規使用,因為連續使用會促進耐藥性細胞株的產生,宜賓細胞,導致輕度污染持續存在。一旦將從培養液中去除,這種輕度污染終將發展成為-污染。具體情況,可根據自己實驗室的環境,自行決定是否使用雙抗。
q:細胞培養,能更換成其它種類的培養基嗎?
a:我們-建議好使用細胞提供機構或細胞庫的生長培養液。有些細胞可能會適應在不同培養基中生長,在做好保種的條件下,細胞培養,可以分出部分細胞做測試。
q:中可能出現的沉淀物是什么?
a:基于多年的實驗研究,用于細胞培養的胎牛以及其它中可能會存在以下種類的沉淀物:
1纖維蛋白,它是經常出現的較大的沉淀物,可以達到 1-2mm,可以用肉眼觀察到。因為都是在低溫下進行收集和快速處理的,一些纖維蛋白原可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體在處理過程中仍然處于溶解狀態,當經過的過濾分裝后,單細胞測序,就會在瓶中凝結出現纖維蛋白沉淀。
2磷酸鈣,它也是常見的一種沉淀物,通常會使出現渾濁,并且在 37℃ 培養的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點, 這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動,因此經常被誤認為是微生物污染。
3膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質。他們也是中出現沉淀物的常見原因。