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qpcr熒光定量是指在反應體系中加入熒光基因,利用熒光信號積累實時監測整個pcr進程,---通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
qpcr熒光定量技術不僅實現了pcr從定性到定量的---,而且與常規pcr相比,qpcr熒光定量具有特------、靈敏度高、重復性好、定量準確、速度快、全封閉反應、有效解決pcr污染問題、自動化程度---特點,已成為國際---的---分子定量的標準方法,目前在基因表達研究和------檢測等領域已得到廣泛應用如---動植物檢測、rnai基因失活率檢測、病原微生物或---含量檢測、基因差異表達、基因分型。
acequniversalsybrqpcrmastermix
圖1.廣闊的定量閾
以hela細胞cdna為稀釋液,將puc19質粒進行7個10倍梯度稀釋,第7個稀釋梯度中質粒拷貝數濃度約為7copies/4μl。使用aceq universal預混液對各稀釋梯度中的puc19質粒進行檢測,每孔模板使用量為4μl。可以看到,aceq universal預混液在寬廣的模板量區間內具有線---,可輕松檢測出個位數拷貝的待測模板。
圖2.---的特---
對隨機選取的38個體系進行qpcr檢測,驗證aceq universal預混液擴增特---。通過對融解曲線分析可知,38個體系均無非特---擴增。說明aceq universal預混液擁有---的特---。
圖3.全平臺通用
使用aceq universal預混液在不同類型的qpcr儀機型:steponeplustm、quantstudiotm3、lightcycler 96上擴增gapdh基因,定量結果---。說明aceq universal預混液儀器適用性廣,無需針對不同儀器調整rox濃度。
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