mullis起初使用的dna聚合酶是 dna 聚合酶 i 的klenow片段,1988年初,keohanog改用t4 dna聚合酶進行pcr,其擴增的dn---段很均一,真實性也較高,只有所期望的一種dn---段。但每循環一次,仍需加入新酶。1988年saiki 等從溫泉中分離的一株水生嗜thermus aquaticus 中提取到一種耐熱dna聚合酶。
此酶具有以下特點:
耐高溫,在70℃下反應2h后其殘留活性大于原來的90%,迷你pcr儀報價,在93℃下反應2h后其殘留活性是原來的60%,在95℃下反應2h后其殘留活性是原來的40%。
在熱變性時不會被鈍化,不必在每次擴增反應后再加新酶。
---提高了擴增片段特---和擴增效率,迷你pcr儀多少錢,增加了擴增長度2.0kb。由于提高了擴增的特---和效率,因而其靈敏性也---提高。為與大腸多聚酶iklenow片段區別,將此酶命名為taqdna多聚酶taq dnapolymerase。此酶的發現使pcr廣泛的被應用。
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實時熒光定量pcr儀
在普通pcr儀的基礎上增加一個熒光信號采集系統和計算機分析處理系統,就成了熒光定量pcr儀。其pcr擴增原理和普通pcr儀擴增原理相同,只是pcr擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特---結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統得出量化的實時結果輸出。把這pcr儀叫做實時熒光定量pcr儀(qpcr儀)。熒光定量pcr儀有單通道,雙通道,和多通道。當只用一種熒光探針標記的時候,選用單通道,有多熒光標記的時候用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記的目的基因表達產物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。該儀器主要用于醫學---檢測,生物醫研發,食品行業,科研院校等機構。
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普通的pcr儀
把一次pcr擴增只能運行一個特定退火溫度的pcr儀,叫傳統的pcr儀,也叫普通pcr儀。如果要做不同的退火溫度需要多次運行。主要是做簡單的,對目的基因退火溫度的擴增。該儀器主要應用于科研研究,教學,醫學---,迷你pcr儀,檢驗檢疫等機構。
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