骨sui內皮祖細胞的分離培養
方法:使用密度梯度離
心法汲差速貼壁法聯合的方法培養內皮祖細胞,在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況及形態變化,海南細胞,使用dil標記的---化低密度脂蛋白和fitc標記的荊豆凝集素1雙熒光染色、流式細胞儀檢測細胞表面抗原cd34、cd133 表達情況.結果與結論:培養前4 d---不明顯第5~10天迅速增殖,細胞實驗外包,并可見細胞集落及線狀結構形成培養第7天的內皮祖細胞具有吞噬dil標記的---化低密度脂蛋白和fitc標記的荊豆凝集素1的功能流式細胞儀檢測體外培養第十天的細胞,cd133+細胞占19.2%,cd34+細胞占28.7%,cd34+ /cd133+細胞占19.1%.說明密度梯度離心法聯合差速貼壁法可在體外有效分離培養大鼠骨sui內皮祖細胞.
細胞實驗介紹——細胞運動能力檢測:
細胞劃痕實驗是體-擬細胞遷移能力和修復能力快捷的檢測方法。在長滿的細胞培養板或者培養皿中,沿著中線使用移液器槍頭或者其他硬物劃1-3條平行的直線,去除中線的細胞,細胞系,細胞在0h、12h、24h后,細胞遷移實驗,觀察細胞往中線遷移情況,判斷細胞遷移能力。
一般流程:細胞接種培養-劃痕-不同時間點拍照
細胞遷移和侵襲實驗是體-擬細胞遷移和侵襲能力的檢測方法。使用不同孔徑的聚---膜transwell小室放入培養板中,將細胞接種于小室中,利用培養液成分的差異-細胞運動,檢測細胞的遷移和侵襲能力的差異。
一般流程:transwell小室準備-細胞接種-細胞培養-transwell小室染色-顯微鏡拍照
結果示例:
圖 a 細胞劃痕實驗圖;b,c 細胞遷移和侵襲實驗圖
yao物對細胞的ic50檢測
ic50 (half maximal inhibitory concentration)是指被測量的拮抗劑的半抑制濃度。它能指示某一yao物或者物質(yi制劑)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物質,比如酶,細胞受體或是微生物)的半量。在凋亡方面,可以理解為一定濃度的某種藥wu-腫liu細胞凋亡50%,該濃度稱為50%抑制濃度,即凋亡細胞與全部細胞數之比等于50%時所對應的濃度,ic50值可以用來衡量yao物-凋亡的能力,即-能力越強,該數值越低,當然也可以反向說明某種細胞對yao物的耐受程度。