脂質體瞬時轉染
1、細胞h9c2 (hela) 6孔板hela1x10°/孔。
2、轉染前換上沒有抗sheng素的dmem+胎清(10%)。
3、將質粒dna (約2-4ul) 2ul 加入dorf管中+dmem至50u1。
4、脂質體5ul補培養基至50ul混勻靜止5分鐘(質粒與脂質體比例為1:2或1.5:2.5)。
5、將含有脂質體的培養基與含質粒的混合總體積100ul室溫放置30分鐘。
6、吸取混合物均勻加入每一個孔中。
7、將6孔板放入培養箱中繼續培養6小時后吸出培養基換上新配置的培養基dmem6ml+胎清600u1+三抗300u1。
8、培養24小時。
細胞傳代培養
操作步驟
1.將長滿細胞的培養瓶中原來的培養液棄去。
2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底細胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移，寧夏細胞，原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將胰酶棄去，加入10m培養液終止-。觀察-也可以用肉眼，當見到瓶底發白并出現細zhen孔空隙時終止-。一般室溫-時間約為1- -3分鐘。
4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，基因編輯技術，分到另外兩到三瓶中，實踐培養液塞好橡皮塞，流式細胞檢測結果分析，置37°c下繼續培養。第二天觀察貼壁生長情況。
附:-液配制方法:
稱取0.25克胰酶蛋白酶(活力為1 : 250)， 加入100ml無ca2+、mg2+的hanks液溶解，濾器過濾chu菌，4°c保存，用前可在379c下回溫。胰酶溶液中也可加入edta，使zui終濃度達0.02%。
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