磁性細(xì)胞標(biāo)記方式
應(yīng)用macs技術(shù)進行磁性細(xì)胞分選重要的一點是高的標(biāo)記。要盡可能地增強陽性細(xì)胞的標(biāo)記，并減弱背景染色。有兩種基本的磁性標(biāo)記方式:直接標(biāo)記和間接標(biāo)記。
1、直接磁性細(xì)胞標(biāo)記(direct ---ic cell labeling)
(磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得的細(xì)胞)直接標(biāo)記是快速、zui特異的磁性標(biāo)記方法。目前有多種分選人、小鼠、大鼠以及非人類靈長類細(xì)胞的macs直標(biāo)微珠可供選用。
2、間接磁性細(xì)胞標(biāo)記(indirect ---ic cell labeling )
(磁珠結(jié)合不需要的細(xì)胞，游離于磁場的細(xì)胞為所需細(xì)胞)間接磁性細(xì)胞標(biāo)記需要聯(lián)合使用單ke隆或者多ke隆抗ti和macs間標(biāo)微珠。未結(jié)合抗ti、生物素化抗ti或者熒光素標(biāo)記抗ti均可作為一抗標(biāo)記細(xì)胞，再使用抗免yi球蛋白微珠、抗生物素或鏈霉親和素微珠、抗熒光素微珠作為二抗磁性標(biāo)記細(xì)胞。幾乎針對任何種系任何細(xì)胞的任何一種單抗或多抗，均可用于間接標(biāo)記。間接標(biāo)記主要在如下情況時選用:當(dāng)沒有直標(biāo)磁珠時;需要用幾種抗ti的混合物同時分選或去除多種類型的細(xì)胞;間接標(biāo)記有放大作用，流式細(xì)胞，因此可在磁性分選抗原表達弱的目的細(xì)胞時使用;使用自備或者配體的磁珠分選中。( -般而言，陰性分離法的磁珠用量比陽性分離法的大，陽性分離法用行更多。)
大鼠shen小球內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)
2.原代細(xì)胞培養(yǎng):(1)shen臟原位灌洗:sd大鼠用25%烏拉坦腹整注-zui后仰臥固定。胸腹部消森并分離胸主動脈，以無菌的冷hank液漱朱洗血.同時剪破shen靜脈利于液體流出。1-2min后shen臟色澤變白，取出雙shen冰浴保存。
(2)shen小球分離:參照green等方法改進。將灌洗后的shen臟撕下shen被膜.去除髓質(zhì)后將皮質(zhì)剪成約1-2mm的碎塊，輕碾shen皮質(zhì)依次通過80.120和200目鋼篩。收集shen小球。
(3)shen小球---和培養(yǎng)；將提取的shen小球加人0.1% in 型膠原酶---后收集沉淀。以2x10* 的shen小球數(shù)接種于鋪有1%明膠培養(yǎng)瓶內(nèi)，加a配制好的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液(mfm.hepes 20 mmnovl 20%胎牛xue清0. 66 u---/ml.血管內(nèi)皮生長因子20 ng /ml、---鈉100 u/ml.青莓su100 u/ml、鏈霉su100 μ/ml) .靜止培養(yǎng)3 d后逐日觀察shen小球的貼壁情況。待shen小球充分貼壁后常規(guī)換液.第3同進行純化。
---檢測
本公司應(yīng)用mtt比色法， 檢測細(xì)胞存活和生長。其檢測原理為huo細(xì)胞內(nèi)線粒體中的---脫氫酶能催化外源性無色的mtt形成藍色的結(jié)晶formazan，并沉積在細(xì)胞中，而---無此功能。二jia基---dmso能溶解細(xì)胞中的formazan，用酶聯(lián)mian疫檢測儀在一定波長處測定其光吸收值，吉林細(xì)胞，可間接反映huo細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，mtt結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。
該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、-的抗腫liu藥wu篩選、細(xì)胞毒性試驗、以及腫liu放she敏感性測定等。服務(wù)內(nèi)容 1. 細(xì)胞接種：收到客戶細(xì)胞后，癌細(xì)胞，我們會用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)細(xì)胞，得出細(xì)胞懸液濃度。計算出應(yīng)稀釋的倍數(shù)，按mtt試劑盒要求在96孔板內(nèi)接種 相應(yīng)濃度的細(xì)胞懸液；
2. 細(xì)胞培養(yǎng)：然后在無菌恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)接種好的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，并實時觀察細(xì)胞狀態(tài)；
3. yao物處理并呈色：按不同濃度梯度加入yao物作用細(xì)胞；
4. 溶解，流式細(xì)胞技術(shù)，比色：加入mtt檢測試劑，按操作要求孵育相應(yīng)時間，在mei標(biāo)儀內(nèi)檢測對照組和實驗組的吸光值。并處理數(shù)據(jù)得出比色結(jié)果。
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