在玻璃燒杯中注入去離子水,加入depc使其終濃度為0.05%~0.1%depc-h2o。depc二焦---為活性很強的物,須在通風櫥中小心使用
將待處理的塑料制品放入一個可以高溫滅菌的容器中,注入depc-h2o,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中,在通風柜中37℃ 或室溫下處理過夜。
將depc-h2o小心倒入廢液瓶中,將裝有depc- h2o 處理過的塑料制品的容器以鋁箔封口,高溫高壓蒸汽滅菌至少30分鐘。
滅菌塑料制品烘烤干燥,置潔凈處備用。
玻璃和金屬物品250 ℃烘烤3小時以上。
轉錄組重測序
轉錄組測序的研究對象為特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有mrna的總和。轉錄組研究是基因功能及基因結構等研究的基礎,fish檢測,通過新一代高通量測序,能夠快速的獲得某一物種特定組織或在某一狀態下的幾乎所有轉錄本序列信息,已廣泛應用于---診斷、基礎研究和研發等領域。
轉錄組resequencing針對的是有參考基因組的物種。用新一代高通量測序技術對某物種的特定組織或細胞進行轉錄組測序,與參考基因組比較,pcr檢測,可以得到基因表達差異、可變剪接、融合基因等遺傳調控信息。
逆轉錄---構建及包裝
逆轉錄---retrovirus是一類rna---。在逆轉錄酶的作用下,以---rna為模板合成cdna再通過dna、轉錄、翻譯等過程形成---顆粒。逆轉錄---表達系統是一種新的重組蛋白表達系統,由逆轉錄---載體、輔助載體表達---包裝需要的蛋白質和包裝細胞系組成。逆轉錄---載體在外源基因表達、基因沉默、、生物制藥等得到廣泛的應用。逆轉錄---載體主要優點:轉染范圍廣,可以各種細胞類型,轉入的外源基因可完全融合,對細胞率高,細胞不產生病變,可建立細胞系長期持續表達外源基因。
逆轉錄---載體系統共有兩部分組成:包裝細胞系和缺陷---本身。在逆轉錄---載體中,去除了正常的蛋白編碼序列而保留了和包裝信號,通過分子技術將目的基因插入此載體上,pcr,而包裝細胞系能提供---載體包裝成---粒子所需的結構蛋白。當重組---載體導入包裝細胞后,缺陷---載體和包裝細胞的互補作用共同完成---裝配,該---顆粒可其它宿主細胞,此時目的基因進入該細胞并整合到細胞基因組中,導致插入序列在宿主細胞中表達,pcr引物設計,產生目的蛋白。宿主細胞不能像包裝細胞那樣為缺失結構基因的逆轉錄---提供結構蛋白,因而在宿主細胞內不會產生新的毒顆粒,---了該載體在生物制品領域的生物安全性問題。