磁性細(xì)胞標(biāo)記方式
應(yīng)用macs技術(shù)進(jìn)行磁性細(xì)胞分選重要的一點(diǎn)是高的標(biāo)記。要盡可能地增強(qiáng)陽性細(xì)胞的標(biāo)記，并減弱背景染色。有兩種基本的磁性標(biāo)記方式:直接標(biāo)記和間接標(biāo)記。
1、直接磁性細(xì)胞標(biāo)記(direct -ic cell labeling)
(磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得的細(xì)胞)直接標(biāo)記是快速、zui特異的磁性標(biāo)記方法。目前有多種分選人、小鼠、大鼠以及非人類靈長類細(xì)胞的macs直標(biāo)微珠可供選用。
2、間接磁性細(xì)胞標(biāo)記(indirect -ic cell labeling )
(磁珠結(jié)合不需要的細(xì)胞，游離于磁場的細(xì)胞為所需細(xì)胞)間接磁性細(xì)胞標(biāo)記需要聯(lián)合使用單ke隆或者多ke隆抗ti和macs間標(biāo)微珠。未結(jié)合抗ti、生物素化抗ti或者熒光素標(biāo)記抗ti均可作為一抗標(biāo)記細(xì)胞，成都細(xì)胞，再使用抗免yi球蛋白微珠、抗生物素或鏈霉親和素微珠、抗熒光素微珠作為二抗磁性標(biāo)記細(xì)胞。幾乎針對任何種系任何細(xì)胞的任何一種單抗或多抗，均可用于間接標(biāo)記。間接標(biāo)記主要在如下情況時(shí)選用:當(dāng)沒有直標(biāo)磁珠時(shí);需要用幾種抗ti的混合物同時(shí)分選或去除多種類型的細(xì)胞;間接標(biāo)記有放大作用，細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，因此可在磁性分選抗原表達(dá)弱的目的細(xì)胞時(shí)使用;使用自備或者配體的磁珠分選中。( -般而言，陰性分離法的磁珠用量比陽性分離法的大，陽性分離法用行更多。)
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-是指同一來源的細(xì)胞逐漸產(chǎn)生出形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征各不相同的細(xì)胞類群的過程，其結(jié)果是在空間上細(xì)胞產(chǎn)生差異，在時(shí)間上同一細(xì)胞與其從前的狀態(tài)有所不同。-的本質(zhì)是基因組在時(shí)間和空間上的選擇性表達(dá)，通過不同基因表達(dá)的開啟或關(guān)閉，終產(chǎn)生-蛋白質(zhì)。細(xì)胞-是指將一群不同類型或者形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征存在差異的細(xì)胞通過生物學(xué)、物理學(xué)等手段，將之轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂邢嗨?相同形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征的細(xì)胞群體的過程。
q:如何避免中沉淀物的出現(xiàn)？
a:首先要注意正確的解凍步驟，而且溶解過程中一定要每隔一段時(shí)間均勻而緩慢的搖動(dòng)。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應(yīng)該盡量避免：
1熱滅活；
2在 37℃ 下培養(yǎng)；
3反復(fù)凍融；
4γ 射線照射；
5長期儲存在 2-8℃；
6在室溫下放置時(shí)間過長
q:如何去除中的沉淀？
a:如想去除這些絮狀沉淀物，流式細(xì)胞技術(shù)，可以將分裝到無菌離心管中，以 400g 離心，上清液即可直接加入到培養(yǎng)基 內(nèi)一起過濾。
注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)檫@可能阻塞濾膜。
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