甲l基化特---的pcr
herman 等 1996 在使用重---酸鹽處理的基礎上新建的一種方法。該方法敏感性高，主要用于作定性研究。用------鹽處理基因組dna，所有未發生jia基化的胞嘧定被轉化為尿嘧ding，而jia基化的胞嘧定不變；隨后設計針對jia基化和非jia基化序列的引物進行pcr。通過電泳檢測msp擴增產物，如果用針對處理后jia基化dna鏈的引物能得到擴增片段，則說明該位點存在jia基化；反之，說明被檢測的位點不存在jia基化。
特點：適用范圍廣，能夠檢測特異位點是否發生jia基化。
------鹽測序法bisulfite sequencing pcr，bsp
------鹽修飾后測序法 bsp frommer 等 1992 提出的研究 dna jia基化方法，此方法---性及jing確度高，能明確目的片段中每一個 cpg 位點的jia基化狀態。用------鹽處理基因組dna，所有未發生jia基化的胞嘧ding被轉化為尿嘧ding，而jia基化的胞嘧ding不變。隨后設計bsp引物進行pcr，實時定量pcr，在擴增過程中尿嘧定全部轉化為胸腺嘧定，zui后對pcr產物進行測序就可以判斷cpg位點是否發生jia基化，稱為bsp-直接測序法。將pcr產物克long至載體后進行測序，可以提高測序成功率，安康pcr，這種方法稱為bsp-ke隆測序法。
特點：jing確度高，能夠準確檢測出jia基化的程度百分比。
聚合酶鏈式反應(pcr)
操作步驟
1.在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
1qpcr buffer
5 μl
dntp mix( 2mm )
4 μl
引物1(10pm)
μl 2
引物2 ( 10pm)
2μl
taq酶(2u/ul)
1 μl
dna模板( 50ng-1μg/μl )
1 μl
加ddh2o至
μl 50
視pcr儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，pcr檢測，立即置pcr儀上執行擴增。-般:在93°c
預變性3-5min ，進入循環擴增階段: 93°c 40s***58°c 30s***72°c 60s ，循環30-35
次，后在72°c保溫7min。
3.結束反應， pcr產物放置于4°c待電泳檢測或-20°c長期保存。
4. pcr的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油，實時熒光定量pcr，需用100ul進行抽提反應混合液，以
除去石蠟油;否則，直接取5- 10μl電泳檢測。
單細胞測序英語：single cell sequencing采取優化的下一代dna測序技術ngs檢測單細胞的序列，可以獲得特定微環境下的細胞序列差異以方便研究其功能差異等。對個體細胞的dna測序可以幫助我們了解例如在中的小范圍細胞的變異；對其進行rna測序可以幫助我們了解和鑒別不同的細胞類型與其表現的基因，對研究發育生物學等有較大裨益。
分離單細胞
在全基因組擴增和測序前，有很多方法可以分離細胞個體，其中流式細胞術facs較為常用。個體細胞可以用顯微操作來收集，這樣較為快捷而且成本較低，但是比較有技術難度，而且顯微鏡下對細胞的錯誤分類容易影響實驗結果。激光捕獲顯微切割技術lcm亦可以用來收集單細胞。但是盡管激光捕獲顯微切割可以保留樣本細胞在組織中的空間位置，但是捕獲單細胞的時候容易連帶周圍細胞的物質。高通量的細胞個體分離還可以使用微流控技術。微流控技術和流式細胞技術都能準確而自動地分離無偏樣本。但是，兩種方法都要求首先將細胞從其為環境中脫離，因此可能在rna表達分析中造成對轉錄數據的干擾。
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