蛋白質質譜鑒定服務
蛋白質protein是有機大分子,是構成細胞的基本有機物和生命活動的主要承擔者。蛋白質在催化生命體內各種反應進行、---、抵御外來物質入l侵及控制遺傳信息等方面都起著重要的作用。蛋白質的一級結構是---酸序列,通過鑒定---酸序列來匹配它的蛋白質,這是定性研究,是蛋白質組學的基礎,也是蛋白質組學的重要技術之一。
質譜一般由離子源、分析器mass ---yzer和離子檢測器detector三部分組成。傳統的質譜僅用于小分子揮發物質的分析,但隨著新的離子化技術的出現,如基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(maldi-tof)和電噴霧電離質譜(esi-ms)等,質譜技術的出現為蛋白質分析提供了一種新的途徑。現在蛋白質組學基本研究手段是:以生物質譜技術為,對蛋白質進行-、高通量分離、鑒定和分析。
蛋白質質譜鑒定的基本原理是用蛋白酶將蛋白質---成肽段混合物,經maildi或esi等軟電離手段將其離子化,然后通過分析器將具有特定質核比的肽段離子分離開來。通過實際譜圖和理論上蛋白質經過蛋白酶---后產生的一級質譜峰圖和二級質譜峰圖進行的比對,進行蛋白鑒定。
5.長可以合成多長的引物?
答:引物越長,出現問題的概率就越大。有的公司合成過120base的引物,產率很低。除非需要,建議合成片段長度不要超過80mer,熒光定量pcr,按照目前的引物合---率,80mer的粗產品,全長還不一定正確引物的百分比不會超過40%,后續處理還有丟失很多,的產量很低。
6.需要合成多少od數?
答:根據實驗目的確定。一般pcr擴增,2 od引物,可以做200-500次50ul標準pcr反應。如果是做基因拼接或退火后做連接,1 od就足夠了。但是有些研究人員,就做幾次pcr,但是卻要5-10 od。做全基因構建的引物都比較長,---怎么做,但是我們有些研究人員也要求高od數。片段越長, 全長得率就越低,出錯的幾率就越大。超出需要之外的od數要求,其實也是對社會資源的一種浪費,同時也從一個側面反映了部分研究人員---是新手的自信心不足,總覺得需要重復多次才能成功。
二、大腸菌群檢驗方法:
由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關的---,即:需氧及兼性厭氧、在37°c能分解乳糖產酸產氣的革蘭氏陰性無芽胞。因此大腸菌群的檢測一般都是按照它的定義進行。 目前國內采用的進出口食品大腸菌群檢測方法主要有和原商檢局制訂的行業標準。兩個標準方法在檢測程序上略有不同。
(一):采用三步法,即:乳糖發酵試驗、分離培養和證實試驗。乳糖發酵試驗:樣品稀釋后,選擇三個稀釋度,每個稀釋度接種三管乳糖膽鹽發酵管。36士1c培養48土2h,觀察是否產氣。分離培養:將產氣發酵管培養物轉種于伊紅美藍瓊脂平板上,36士1°c培養18-24h,觀察菌落形態。證實試驗:挑取平板上的菌落,進行革蘭氏染色觀察。同時接種乳糖發酵管36士1°c培養24土2h,觀察產氣情況。
報告:
根據證實為大腸陽性的管數,查mpn表,報告每100ml ( g)大腸菌群的mpn值。具體操作參見gb4789. 3-94 《------食品衛生微生物學檢驗大腸菌群測定》
(二)原商檢局制訂的行業標準,等效采用美國fda的標準方法,用于對出口食品中的大腸進行檢測。本方法采用兩步法:推測試驗:樣品稀釋后,選擇三個稀釋度,自貢pcr,每個稀釋度接種三管lst肉湯。36士1c培養48士2h,觀察是否產氣。證實試驗:將產氣管培養物接種煌綠乳糖膽鹽(bglb)肉湯管中,36士1°c培養48士2h,觀察是否產氣。以bglb產氣為陽性。查mpn表,報告每ml(g)樣品中大腸菌群的mpn值。具體操作參見sn0169-92《------進出口商品檢驗行業標準 出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸檢驗方法》