全轉錄組測序
全轉錄組是指特定組織或細胞在特定狀態下所有轉錄產物的總和，包括mrna和各種noncoding rna。我們知道生物體本身的轉錄過程是一個動態變化且十分復雜的分子作用網絡，如果只是對某個單一rna分子的研究，pcr檢測，有時并不能準確的發現分子作用機制。而競爭性內源rna(cerna)理論闡述了一種全新的轉錄調控模式：cerna包括lncrna、circrna、mrna、假基因等分子能夠通過mirna應答元件microrna respe element， mre競爭性地結合相同的mirna來調節彼此的表達水平。舉個例子：mirna會導致基因沉默現象發生，而如果lncrna競爭性結合了mirna，商洛pcr，從而影響了mirna基因沉默功能實現。
cerna是目前轉錄調控領域的---內容之一，通過全轉錄組研究能夠系統性的闡述cerna的分子作用機制。目前對全轉錄組簡便的方法就是構建2個測序-分別進行測序。標準的生物信息學分析能夠得到mrna、lncrna、circrna、mirna各自的研究內容，靶向調控網絡、cerna網絡、共表達網絡分析可以將這幾種rna聯合起來分析，從而發現新的調控網絡模型。去除rrna的鏈特----，含有的rna信息含量十分豐富，實時熒光定量pcr，通過測序和生物信息學分析能夠得到mrna、lncrna、circrna的鑒定及注釋信息。不過該-構建時會進行片段化選擇從而濾掉了small rna的信息，所以需要另外再構建一個small rna-，進行測序分析后可以得到mirna和其他small rna的鑒定及注釋信息。全轉錄組測序方案路線圖如下所示：
lncrna芯片
long non-coding rnaslncrnas是一類轉錄本長度超過200 nt的功能性非編碼rna分子。目前的研究已證實，lncrna參與x染色體沉默，基因組印記以及染色質修飾，轉錄ji活，轉錄干擾，核內運輸等多種重要調控過程。隨著對lncrna在哺乳動物進化及人類---發生和發展中作用的日益關注，lncrna調控機制已成為當前遺傳學研究的---問題。
篩選出差異表達的lncrna是研究其在人類---發生中所扮演角色的基礎。富衡生物為用戶提供高通量的lncrna芯片進行lncrna表達譜分析，該芯片基于agilent的sureprint技術生產，實驗。
技術優勢
信息覆蓋廣泛：覆蓋了多個quan威lncrna數據庫發布的數據；提供人，小鼠，大鼠的lncrna檢測。
lncrna和mrna同時檢測：芯片上包含有的lncrna和新的mrna序列檢測探針。一次芯片實驗可同時對lncrna和mrna進行分析。
平臺成熟---：采用agilent原位噴墨合成技術，了高檢測靈敏度和特---。
數據分析：提供lncrna和mrna表達譜差異分析和功能分析，以及二者的關聯分析。
分子實驗介紹——熒光定量pcr檢測
熒光定量pcr是檢測生物樣品中rna含量的普遍的方法，通過熒光染料或熒光標記的特---的探針，對pcr產物進行標記---，實時在線監控反應過程，結合相應的軟件可以對產物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度。目前主要使用sybr green和taqman法對rna含量進行檢測。sybr green在低樣本量時成本較低，目前選用的較多。
sybr green i是一種只與dna雙鏈結合的熒光染料。當它與dna雙鏈結合時，發出熒光；從dna雙鏈上釋放出來時，---多少錢，熒光信號急劇減弱。因此，在一個體系內，其信號強度代表了雙鏈dna分子的數量。sybr green熒光染料-量pcr的基本過程是：1、開始反應，當sybr green染料與dna雙鏈結合時發出熒光。2、dna變性時，sybr green染料釋放出來，熒光急劇減少。3、在聚合延伸過程中，引物退火并形成pcr產物。4、聚合完成后，sybr green染料與雙鏈產物結合，定量pcr系統檢測到熒光的凈增量加大。
實驗流程：細胞或組織rna提取-rna濃度檢測-rna逆轉錄-定量pcr檢測。
結果示例：
圖 a 基因擴增曲線圖；b 基因擴增溶解曲線圖；c mrna相對表達量變化
從圖中可以擴增曲線可以看出目的rna擴增效果，溶解曲線可以看出引物識別特---情況，通過使用δδct方法計算可以得到每個組中目的mrna表達變化。
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